динамички БИОСЕНЗОРИ helix plus Комплет за редуцирачки агенси 1

Клучни карактеристики

• Овозможува редукција на дисулфидните врски со помош на TCEP.
• Компатибилен со протеини и антитела (MW > 20 kDa).
• Место специфично намалување на антителата.
• Можно е итно спојување на намалените молекули (видете во упатството за употреба HK-MAL).
• Редукцијата на повеќе лиганди може да се изврши во исто време.
• Вклучува реагенси за две индивидуални реакции на редукција.

Опис на производот

Број на нарачка: РК-ПА-1

Табела 1. Содржина и информации за складирање

Материјал	капа	Износ	Складирање
TCEP (500 mM)	Црвено	2 x 20 µL	-20°C
Намалување на баферот [1]	Бело	2 x 1.8 mL	-20°C
Колона за центрифугирање на прочистување	Црвено	4 x	2-8°C
Реакциони цевки од 2.0 mL за спин колона за прочистување		4 x	RT
Центрифугална филтер единица (10 kDa MWCO)		2 x	RT
Цевка за собирање центрифугирање		4 x	RT

Само за истражувачка употреба.

Овој производ има ограничен рок на траење, ве молиме погледнете го датумот на истекување на етикетата.

ВАЖНО

Производите може да се испорачуваат на различни температури, но складирањето треба да се придржува до упатствата наведени во Табела. Кашеста маса на смолата во колоната за центрифугирање на прочистување содржи 0.02 % натриум азид.

Потребни се дополнителни материјали

Табела 2. Дополнителни материјали

Материјал	Коментари
Микроцентрифуга на клупа	Потребен опсег на брзина помеѓу 1,000 xg до 13,000 xg
Вител
Реакциони цевки од 1.5 mL

Сите потребни решенија и бафери се вклучени во комплетот.

3-чекор намалување на биомолекула во реакциона цевка

Ве молиме прочитајте го целиот протокол пред да започнете и изведете ги сите чекори без прекин.

СОВЕТ

Овој протокол може да се изврши истовремено за повеќе реакции на спојување

Баферска размена на протеини/антитела

1. Навлажнете ја мембраната на единицата за центрифугална филтер со 100 µL редуцирачки пуфер.
2. Додадете прибл. 200 µg (до 500 µg) протеин/антитело на единицата за филтрирање од чекор 1. Доколку е потребно, додадете го редуцирачкиот пуфер во филтерот додека не се постигне максимален волумен од 450 μL и центрифугирајте на 13,000 xg (до 14,000 xg) за 5 мин и отфрлете го протокот.
3. Додадете 350 µL редукционен пуфер и центрифугирајте на 13,000 xg 5 мин.
4. Повторете го чекор 3, уште еднаш со последно време на центрифугирање од 10 минути за да добиете конечен волумен од прибл. 80 µL.
5. Собери сampили со пипета од 100 µL во нова цевка или со ставање на уредот за филтрирање наопаку во нова центрифугална цевка, центрифугирајте 2 минути на 1000 x g.

Намалување со TCEP

1. Подгответе раствор од 2.5 mM TCEP во редуцирачки пуфер со додавање 1 µL од 500 mM TCEP во 199 µL редуцирачки пуфер.
   Подгответе се секогаш директно пред употреба.
2. Додадете намалување на баферот на sampвијала за вкупен волумен од 98 µL и додадете 2 µL 2.5 mM TCEP раствор за да се добие конечна концентрација од 50 µM TCEP. Измешајте ја реакцијата со пипетирање нагоре и надолу.
3. Инкубирајте го растворот на 37°C со 400 вртежи во минута за 2 часа за да се обезбеди целосно намалување.

Прочистување и концентрација

1. Израмнете две колони за центрифугирање за прочистување (црвено капаче) за едно миење TCEP:
   a. Отстранете го долниот заптив на столбот и олабавете го капачето (не отстранувајте го капачето).
   b. Ставете ја колоната во реакциона цевка од 2.0 mL.
   c. Центрифугирајте на 1,500 × g 1 минута за да го отстраните растворот за складирање.
   d. Додадете 400 µL редукционен пуфер во смолата на колоната. Центрифугирајте на 1,500 × g 1 минута за да се отстрани пуферот.
   e. Повторете го чекорот г и исфрлете го добиениот пуфер од реакционата цевка. Колоната за центрифугирање на прочистување сега треба да биде во сува состојба.

TCEP миење

a. Ставете ги колоните од претходниот чекор во нови епрувети за реакција од 1.5 mL.
b. Отстранете го капачето на колоната за центрифугирање број 1 и нежно истурете го sampдо врвот на креветот со смола.
c. Центрифугирајте на 1,500 xg 2 минути за да го соберете sample (проток-преку). Отфрлете ја колоната за центрифугирање за прочистување по употреба.
d. Отстранете го капачето на колоната за центрифугирање број 2 и истурете го sampле од претходниот чекор до креветот со смола.
e. Центрифугирајте на 1,500 xg 2 минути за да го соберете sample (проток-преку). Отфрлете ја колоната за центрифугирање за прочистување по употреба.
f. Тиол спојка според упатството за употреба (HK-MAL-1 или HK-MAL-2) на намалени sampможе да се изврши.

Дополнителни информации

Размена и концентрација на бафер со центрифугални филтри 

1. Земете една центрифугална единица за филтер, додадете соодветен волумен на тампон во уредот за филтрирање и затворете го.
2. Ставете го капачениот филтер во роторот на центрифугата, порамнувајќи го ременот на капачето кон центарот на роторот; противтежа со сличен уред.
3. Вртете го уредот со 13,000 xg (или 14,000 xg) за даденото време.
4. Отстранете го протокот и повторете ги чекорите 1-3.
5. Извадете го склопениот уред од центрифугата и одделете го уредот за филтрирање од цевката за микроцентрифуга.
6. За да го вратите конјугатот, поставете го уредот за филтрирање наопаку во чиста центрифугална цевка, порамнувајќи го отвореното капаче кон центарот на роторот; противтежа со сличен уред. Вртете 2 минути со 1,000 xg за да го пренесете sampод уредот до цевката.
   

Корисни броеви за нарачки

Табела 3. Броеви на нарачки

Име на производ	Износ	Нарачка бр
Комплет за спојување heliX ® Тиол 1	5 x	HK-MAL-1
Комплет за спојување heliX ® Тиол 2	5 x	HK-MAL-2
Центрифугална филтер единица (3 kDa MWCO)	5 ЕЕЗ.	CF-003-5
Центрифугална филтер единица (10 kDa MWCO)	5 ЕЕЗ.	CF-010-5
10x бафер А [2]	50 mL (добива 500 mL)	BU-P-150-10
5x тампон B [3]	50 mL (добива 250 mL)	BU-P-1000-5

Контакт

Dynamic Biosensors GmbH	Dynamic Biosensors, Inc
Перхтингер ул. 8/10	300 Трговски центар, апартман 1400
81379 Минхен	Вобурн, м-р 01801
Германија	САД

Информации за нарачка order@dynamic-biosensors.com
Техничка поддршка support@dynamic-biosensors.com

1. Намалување на тампон: 100 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 300 mM NaCl, 5 mM EDTA, pH 7.4
2. Тампон А: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 150 mM NaCl, pH 7.2
3. Тампон Б: 50 mM Na2HPO4/NaH2PO4, 1 M NaCl, pH 7.2

ПОДДРШКА НА КЛИЕНТИТЕ

www.dynamic-biosensors.com
Инструментите и чиповите се конструирани и произведени во Германија.
©2024 Dynamic Biosensors GmbH | Dynamic Biosensors, Inc. Сите права се задржани.

Документи / ресурси

динамички БИОСЕНЗОРИ helix plus Комплет за редуцирачки агенси 1 [pdf] Упатство за користење RK-PA-1, хеликс плус комплет за редуцирачки агенси 1, heliX плус, комплет за редуцирачки агенси 1, комплет за агенси 1, комплет 1

Референци

• Упатство за употреба